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Agilent安捷伦液相色谱使用问题与解决方法

2018年04月18日 10:24   来源:东莞市谱标实验器材科技有限公司
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Agilent安捷伦液相色谱使用问题与解决方法

1 、如何成为真正的液相高手
(1)、一定要珍惜仪器厂商提供的各种培训,因为他们的培训很有针对性,而且很专业。
(2)、要多做,液相是一个比较复杂的系统,在做样的过程中,总会遇到各种问题,通过自己的大脑解决问题,慢慢积累就会穴道很多东西。其次要敢于动手,不要总担心会把仪器弄坏,拆仪器的时候细心一点就好了,记着各个部件的顺序,连接方式。动手次数多了,成功的机会就多了,也就更有信心了。
(3)、要看一些相关理论的书籍,要了解一些关于液相的分离原理,如何优化色谱系统和峰形,能够自己解决一些分离的问题。这样才是一个液相高手。
如果只是会很熟练的使用工作站和维修仪器,排除故障,我觉得这只是一个操作高手,而不是一个真正的液相高手。

2、新装82341 GPIB 板,如何与ChemStation 通讯?
在 LC ChemStation CD-ROM 中有安装说明,还包括驱动程序安装信息。请在 Windows® Explorer 中查看子目录: \Manuals\Installation\LC Systems。您在此处可找到《安装手册》,其中包含有关如何安装 GPIB 板以及如何调用驱动程序的逐步操作说明。

3、为什么进样后在工作站在线图谱上看不到红色开始线?
ChemStation 软件有一个“在线图谱”窗口,在此窗口中可显示从所连接的检测器接收到的所有信号。当进样样品时,会在“在线图谱”窗口中显示一条竖直的红色“开始线”。这条红色线标志着启动该软件进行原始数据的收集。如果不显示这条红色线,则不会收集数据。 如果不显示“开始线”,请检查检测器上的??氐缋拢ㄈ绻?1050 或 1090 系列液相色谱仪的话)。如果缺少??氐缋?,则需要进行安装。如果安装了模-数转换箱或板 (35900 ADC),则需要从模-数转换设备到液相色谱仪拉一根??氐缋?。检查所有的 CAN 电缆,确保它们都连接到 1100 系列液相色谱仪上

4、完美的波长如何选择
做一个新的方法,关键是选择好的仪器条件,更关键的是波长正确。但是怎样的波长才算是完美的那,比如说我已经作了全扫描,那么怎么去选择波长哪???一般选择zui大吸收波长为检测波长,当然也要结合自己的实际情况来中和一下如果要达到zui大检测灵敏度,zui大吸收波长是首位选择。如果你使用的是DAD,那么建议你将Sample WL设定为zui大吸收波长,Bandwidth不能低于你设定的slit的值。默认推荐的Bandwidth为半峰宽。如果你在一次分析中有zui大吸收波长不同的物质需要同时检测,可以使用检测器的Timetable进行波长的切换避免选用低波长,波长越长越容易做

5、柔性不锈钢毛细管线外面的彩色标记是什么意思?
安捷伦柔性不锈钢管线外部的彩色标记表示管的内径 (ID): 红色 表示内径为 0.12mm 或 0.005 英寸。 绿色 表示内径为 0.17mm 或 0.007 英寸。 蓝色 表示内径为 0.25mm 或 0.010 英寸。 橙色 表示内径为 0.50mm 或 0.020 英寸。

6、更换活塞密封圈后,建议采用什么磨合程序?
注意这个程序适合于反相密封圈,但不适合于正相密封圈?;够崴鸹嫡嗝芊馊?。 安装新的密封圈后,进行zui初的“磨合”期。在至少 350bar 的反压下泵入异丙醇 15-30 分钟。这要通过使用原来的色谱柱或阴尼管线来产成压力.。 有关 1100 系列 LC 泵的密封圈磨合程序,请参见此附件。

7、1050和1100 系列 LC 泵的活塞密封圈和活塞的部件号是什么?
旧部件号 新部件号 活塞密封圈 5062-8516 5063-6589 (2pk) 活塞 5062-2441 5063-6586 注意:同时使用新的活塞和密封圈时,不再需要固定器 (01018-22706)。

8、为什么灯不亮?
很可能是灯老化或灯坏了。请按照下列诊断方法对检测器进行测试。如果需要,则请更换灯。 如果问题依然存在,则请致电安捷伦科技公司。

9、什么原因导致液相色谱仪压力过高?
可能的原因:
1. 排气阀里面的 PTFE 滤蕊堵塞。
2. 压力上限设置太低。
3. 压力传感器堵塞。
建议的措施:
1. 打开排气阀。如果压力依然很高,则更换排气阀内的 PTFE 滤芯。
2. 查看软件的压力上限设置并确保设置值适于分析。
3. 检查系统内的堵塞部位。(如下所述) 要检查是否堵塞,请采用隔离系统的方法来排除故障: 将安装的色谱柱、预色谱柱和预色谱柱过滤器摘开。
①. 如果压力恢复到正常值,则在色谱柱的位置安装 ZDV 接头。 A 如果压力正常,则色谱柱、预色谱柱或过滤器是产生问题的原因。请进行更换。 B 如果压力仍然很高,则在色谱柱的另一端查找堵塞位置(例如:通入检测器或从其通出的管路)。
②. 如果取出色谱柱后压力依然很高,则检查从排气阀到自动进样器的管路。如果压力正常,则使用进样步骤命令将自动进样器的进样阀切换到旁路状态。 A 如果压力正常,则说明自动进样器堵塞。请检查针、针座、针座毛细管和转子密封垫。 B 如果压力依然很高,则检查从进样六通阀到色谱柱入口之间的管线.。

10、用不同批号的色谱柱后如何对分析方法进行测试并确认可用此柱?
首先,在色谱柱包装盒的外面找到它的批号。批号的字体比较小,通常在条形码的下面。批号通常以字母“B”开头,后面是 5 位阿拉伯数字。例如,下面示例中的色谱柱批号为 B99091。 如果找不到包装盒,则查看色谱柱标签上的序列号。要从序列号来确定批号,请安捷伦科技公司 HPLC 色谱柱的。他们会请公司生产部门来查询批号,同时确定其它哪些批号的色谱柱可用。 获得所需的批号或知道您的批号后,可使用以下步骤进行订购: 从安捷伦科技公司。使用特殊的部件号 899999-888, 该号码表示此订单是专用色谱柱。 说明要订购的色谱柱的类型、尺寸和填料粒度大小,包括通用部件号。指出您希望色谱柱是哪个批号,或者哪个批号的色谱柱不能用。示例说明: 部件号 899999-888 Eclipse XDB-C18 分析色谱柱,4.6mm x 250mm,(963967-902) 除了批号为 B99091 和 B99079 的专用色谱柱 用于方法确认目的的色谱柱

11、如何避免峰拖尾和峰分叉?
与色谱柱相关的原因及处理方法
1 色谱柱污染; 处理方法:清洗或更换色谱柱
2 色谱柱填料有问题;处理方法:反冲色谱柱或更换柱头过滤片
3 色谱柱中间出现间断;处理方法:更换色谱柱或填充空隙
4 ?;ぶ?处理方法:更换?;ぶ?
5 样品分布差;处理方法:改进色谱柱进口的设计
6 与色谱柱无关的原因:柱外体积大、样品过量、流动相组分(添加剂、pH值、缓冲液浓度)改变。

12、什么原因导致液相色谱出现神秘峰”?
与色谱柱相关的原因:
1 色谱柱污染; 处理方法:清洗或更换色谱柱
2 ?;ぶ? 处理方法:更换?;ぶ?
3 与色谱柱无关的原因:流动相溶不纯、样品里有其他成分、系统里有气泡、电路问题。

13、什么原因导致柱效(理论塔板数)下降?
与色谱柱相关的原因:
1 色谱柱中间出现间断;处理方法:使用类似的填料填充空隙或更换色谱柱
2 ?;ぶ薹ㄔ儆?处理方法:更换?;ぶ?
3 其他可能的原因:柱外体积大、进样的样品量大、样品溶剂强度比流动相大、流动相的改变。

14、改变填料孔径大小对液相色谱分离有什么影响?
填料孔径越小,允许的流动相线速度越高。zui佳流动相线速度取决于固定相的颗粒大小。在zui佳线速度时,色谱柱生成的理论塔板数zui多。对于内径为 4.6mm 的色谱柱,10um 的颗粒流动相线速度为 0.75ml/min 或 5um 的颗粒流动相线速度为 1.5ml/min 时,塔板数zui多。

15、改变色谱柱直径对液相色谱分析有什么影响?
如果色谱柱直径减半,则灵敏性增加四到五倍(假设进样量不变)。例如,等量的样品进样到内径为 2.1mm 的色谱柱比进样到内径为 4.6mm 的色谱柱所生成的峰高 5 倍左右。 只要线性流动保持不变,则柱效率、理论塔板数、反压和分析时间等参数均与色谱柱内径的减小无关。

16、改变填料颗粒大小和色谱柱的长度对液相色谱分离有什么影响?
如果填料颗粒大小减半,则理论塔板数加倍(假设柱长不变)。如果填料颗粒大小减半,则柱压增加为原来的四倍。 如果柱长加倍,则理论塔板数加倍。如果柱长加倍,则分析时间加倍。随着柱长增加,柱压也线性地增加。 以下是一个根据上述信息选择色谱柱的示例: 一个装填 10um 填料的长度为 200mm 的色谱柱可生成 6000 块理论塔板,这是在很多情况下能提供比较适当的分离的色谱柱效率。将颗粒大小由 10um 减小到 5um,柱长仍为 200mm,则可生成 12000 块理论塔板。然而,这个色谱柱可生成相当于原来四倍的柱压。通常情况下不需要生成 12000 块塔板,因此柱长可减半至 100mm,结果生成 6000 块塔板,同时分析时间也缩短一半;柱压仅比zui初装填 10um 填料的长度为 200mm 的色谱柱高两倍。

17、能否提供一种与我使用的LC 色谱柱相同的色谱柱?
即使用同一种固定相,不同厂商的液相色谱柱也可能具有不同的保留时间。 虽然这里提供了一些不同厂商的色谱柱的参考数据,但这些数据在不同的色谱条件下会有所不同。我们通常根据您的应用情况,向您推荐一种其它的色谱柱。在此之前,我们需要您提供以下信息: 样品的详细信息(样品的成分和要分析的成分); 是否可以接受液相色谱条件的改变; 能否对您的方法进行一些调整。 如果您不能接受分析条件和/或保留时间的改变,则应该继续使用目前的色谱柱。

18、如何选择液相色谱?;ぶ??
?;ぶ淖饔檬怯美捶乐狗治鲋灰恍┪⒘N镏识氯?及在色谱柱上强吸附组分在色谱柱上吸附。为防止样品的杂质不进入色谱分析柱,不出现不必要的峰展宽,?;ぶ敕治鲋奶寤扔υ?1:15 至 1:25 之间。 在理想的情况下,?;ぶ奶盍嫌τ敕治鲋嗤?,以确保得到分析柱较好的色谱图。尽量使?;ぶ敕治鲋?。在我们的目录里,将分析柱和与其配套的?;ぶ性谝黄?。

19、色谱图上出现鬼峰。如何消除?
可能的原因有:
1. 上次进样遗留组分产生
2. 有污染
3. 有气泡
4. 色谱柱问题
5. ?;ぶ?
建议用户:
1. 做样品后应保证有足够时间冲洗色谱柱,。有必要的话在运行结束后使用更强溶剂冲洗色谱柱。
2. 洗脱原色谱柱中的原有污染。
3. 为确保系统中没有气泡,只使用彻底脱气后的溶剂。
4. 更换色谱柱。
5. 更换?;ぶ?。
6. 检查流动相纯度。
7. 检查样品中的其他成分.

 
20、我的色谱图上的峰有拖尾现象。如何改善峰形?
可能的原因:
1. 系统内的死体积大
2. 样品在色谱柱上有吸附
3. 色谱柱使用时间很长
建议用户:
1. 尽量减少流动相管线的死体积,确保管线接头的连接合适减小死体积,由于不同生产厂家的管线的接头和密封垫圈有可能不一样,尽量使用安捷伦公司的管线接头和密封垫圈。
2. 使用洗脱更强的流动相
3. 更换新色谱柱

21、什么原因导致基线波动?
基线波动有可能与实验室的温度及湿度变化有关系。需确保室温及湿度稳定,将仪器从通风橱中取出,并将色谱柱和毛细管进行隔热保温。

22、什么原因导致基线毛刺?
这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来进行确认,如果毛剌消失,则很有可能是由于流动池内有气泡。需要冲洗流动池。如果毛剌仍然存在,则需检查检测器本身的电噪音有关。如果需要更多帮助,则请致电安捷伦科技公司。在中国,请。

23、如何减少基线噪音?
无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱,对样品做合适的前处理以避免污染,并使用 HPLC 级别的溶剂。 连续噪音有可能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵,请先关泵停掉流量,监测基线。如果此时基线平稳,则噪音可能与泵有关系。使用 ChemStation 在线诊断或 LC 手持控制器检查泵方面的故障。如果停泵后噪音继续存在,则说明噪音与检测器有关。首先,请尝试更换灯。如果问题依然存在,则请与安捷伦科技公司。在中国,请。

24、如何避免液相基线飘移?
基线向上飘移表明系统中有污染。请冲洗色谱柱,净化样品,然后使用新溶剂。 向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波动的原因。减小室温变化,将仪器从通风橱中取出,并将色谱柱和毛细管保温隔热。向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是 HPLC 级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸收。

25、如何排除流动相/流动池中的气泡?
避免流动相中产生气泡的zui佳方式是将流动相经脱气装置进行脱气。如果没有脱气装置,则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中的背压,但必须注意不要超过流动池的zui大压力,否则会造成流动池漏液或流动池损坏。 如果流动池中出现气泡,则先摘下色谱柱,用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。将异丙醇以较大的流速注入流动池。 直到基线上看不到尖峰为止。气泡就应该清除掉了。


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